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蛋白免疫印迹western blotting服务（KGSP007）
实验目的：检测组织或细胞中特定目的蛋白的含量。
实验原理：将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。其中的步骤包括蛋白样本提取制备，蛋白定量，电泳，转膜与显色。
实验材料：
试剂：蛋白(全/核/膜/胞浆）提取试剂盒、蛋白定量试剂盒、SDS凝胶电泳上样缓冲液、电泳缓冲液、封闭液、一抗、二抗、ECL发光液、显影液、定影液。
仪器：匀浆器、紫外分光光度计、bio-rad电泳仪、恒温箱。
实验内容与方法：
1、蛋白提取：根据需要测定的目的蛋白主要来源（胞浆、胞核或者全蛋白），区分组织提取或者细胞提取，选取相应的试剂盒。
2、 蛋白定量：bradford法、BCA法或lowery法测定出所提取的蛋白含量。
3、 蛋白变性：5×电泳上样缓冲液，煮沸5~10分钟。
4、 凝胶电泳：垂直电泳分离出目的蛋白条带。
5、 转膜：将SDS丙烯酰胺中的蛋白通过水平电泳的方式转移到PVDF或者NC膜上。
6、 免疫反应：目的蛋白分别与相应的一抗、二抗结合。
7、 显色反应：通过化学发光法将蛋白条带显影至胶片上。
客户提供实验信息：
1、 实验信息（客户提供）：
样本来源：细胞种属来源__________ 或 组织组织来源_________
样本数量：__________
检测蛋白信息：目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________ 主要表达部位（选填）___________________________
一抗信息：抗体名称________________________ 种属来源__________
购买公司______________推荐工作浓度（选填）_________
2、实验材料提供：
（1）样本材料：
新鲜或冷冻细胞不少于106个，新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。
已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。
（2）试剂：蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒，如客户不提供
试剂盒且无特别要求，则选用凯基公司相应试剂盒产品。一抗二抗反应所用抗体客户自备，凯基也可以提供抗体代订服务。
服务周期：（2到8周，根据样本数量而定）
结果提交：提交实验报告书（包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析）、原始数据、图片，文本或电子版。
收费标准：
全蛋白提取（全蛋白提取及蛋白定量结果，80元/样）
核蛋白提取（核蛋白提取及蛋白定量结果，100元/样）
膜蛋白提取（膜蛋白提取及蛋白定量结果，200元/样）
预实验 （客户提供一抗，800元/膜）
正式实验 （客户提供一抗，1000元/膜，每张膜最多8个样）
实验范例：
小鼠骨骼肌组织中myoglobin蛋白电泳条带
beta-actin内参条带
灰度分析
|
检测蛋白
|
样品
编号
|
阳性
面积
|
阳性平均灰度
|
背景
灰度
|
净灰度
|
阳性
灰度积
|
内参值
|
阳性比
|
|
Myoglobin
|
1
|
1443
|
174
|
168
|
6
|
8658
|
463749
|
0.019
|
|
2
|
8043
|
206
|
165
|
41
|
329763
|
401676
|
0.821
|
|
|
3
|
8368
|
212
|
163
|
49
|
410032
|
289212
|
1.418
|
|
|
4
|
10105
|
218
|
163
|
55
|
555775
|
370691
|
1.499
|
|
|
5
|
10927
|
219
|
162
|
57
|
622839
|
357770
|
1.741
|
