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药物体外筛选或细胞增殖检测(MTT法)KGSS001
实验目的:检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响
实验原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
实验材料:
  试剂: MTT、DMSO
   仪器:  超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、酶标仪
  细胞株:细胞株见凯基细胞库目录(凯基公司细胞库拥有近三百株人肿瘤细胞、动物肿瘤细胞、正常细胞、肿瘤细胞耐药株)
实验内容与方法:
1.        细胞计数、稀释细胞悬液,接种96孔细胞培养板,培养;
2.        加入含药培养基,同时设立阴性、溶媒及阳性对照组,培养;
3.        MTT染色,测定;
4.        计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50。
实验信息(客户提供):
样品名称:                  
样品来源:□合成,□提取,□其他:                  
样品量(准确称量):                  mg
分子量:                  
物理性状:□固体,□液体; 溶媒及溶解度:                  
保存温度:□-20℃;□4℃;□室温;□其他:                   
毒性:□有,□无,□不详;说明:                  
筛选细胞株:                  
样品作用时间:                   
注:提供的样品量不低于2mg
服务周期:收到样品两周内提交结果(如样品数量大于20,周期需适当延长)
结果提交:提交实验报告书(IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等)
收费标准:
正常或肿瘤细胞株:800/细胞/样品
耐药肿瘤细胞株:1000/细胞/样品
实验范例
表:氟尿嘧啶对人肺癌细胞A549体外增殖的影响

A549 72h
Group
Mean±SD
Inhibitive Rate
Negative Control Group
0.971±0.046
 
氟尿嘧啶
IC50=2.205ug/ml
25ug/ml
0.180±0.008**
81.47%
12.5ug/ml
0.246±0.025**
74.69%
6.25ug/ml
0.376±0.042**
61.29%
3.125ug/ml
0.481±0.053**
50.43%
1.5625ug/ml
0.576±0.055**
40.67%
0.78125ug/ml
0.600±0.033**
38.22%
0.390625ug/ml
0.637±0.046**
34.41%
0.1953125ug/ml
0.771±0.094*
20.63%
0.09765625ug/ml
0.780±0.079*
19.65%
0.048828125ug/ml
0.874±0.073*
9.97%
0.0244140625ug/ml
0.969±0.036*
0.19%

Mean±SD,n=5,VS Negative Control Group *P<0.05, **P<0.01;
图:氟尿嘧啶对人肺癌细胞A549体外增殖的影响
 
药物体外筛选或细胞增殖检测(CCK-8法)KGSS002
实验目的:检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响
实验原理:CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体PMS的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
实验材料:CCK-8日本株式会社同仁化学研究所),其它同MTT法
实验内容与方法:
1.      细胞计数、稀释细胞悬液,接种96孔细胞培养板,培养;
2.      加入含药培养基,同时设立阴性、溶媒及阳性对照组,培养;
3.      CCK-8染色,测定;
4.      计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50
实验信息(客户提供):同MTT法
收费标准:
正常或肿瘤细胞株:900/细胞/样品
耐药肿瘤细胞株:1200/细胞/样品
 
药物体外筛选或细胞增殖检测(SRB法)KGSS003
实验目的:检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响
实验原理:磺酰罗丹明是一种能与生物大分子的碱性氨基酸结合的水溶性蛋白染料,其结合于细胞中的量的多少可以反映总蛋白量进而反映细胞数的多少。在515nm波长处的OD值与活细胞数呈良好的线性关系。
实验材料:SRBSIGMA),其它同MMT法
实验内容与方法:
1.      细胞计数、稀释细胞悬液,接种96孔细胞培养板,培养;
2.      加入含药培养基,同时设立阴性、溶媒及阳性对照组,培养;
3.      SRB染色,测定;
4.      计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50
实验信息(客户提供):同MTT法
收费标准:
正常或肿瘤细胞株:900/细胞/样品
耐药肿瘤细胞株:1200/细胞/样品